什么是
載體菌株呢?載體代表了新型表達載體,它具備所有廣受歡迎的克隆載體的理想特點和 T7 驅動蛋白表達的*功能。目標基因以相對于修飾的大腸桿菌 tet 啟動子的反義方向插到 lacZ a - 肽編碼區(qū),因此可進行藍 / 白斑篩選。正確定位于目標基因正義方向上游的 T7 轉錄和翻譯信號使表達成為可能。與標準 pET 載體一樣,通過轉化 λ DE3 溶原菌并用 IPTG 誘導或通過 l CE6 感染原始宿主菌生產目標蛋白。
你從載體map上看到的啟動子終止子只是啟動和終止目的基因表達的控制元件。而事實上質粒復制以及質粒功能的實現(xiàn)(比如說抗性)都需要啟動載體基因的表達,也就是說,質粒載體上除了你在看到的啟動子,還有若干個質粒結構基因的啟動子,只是這些啟動子一般不需要人為控制,所以沒有體現(xiàn)在載體圖譜上。
在菌株中當存在x-gal時產生白菌落表型,而帶有非重組載體的菌落變藍。由于T7驅動的蛋白表達要求插入片段克隆到相對于tet啟動子的反義方向,因此實際上沒有目標序列的基礎表達。相對于pET載體,pETBlue質粒上高拷貝PUC復制起點增加了質粒產量,為測序、突變和其它質粒操作帶來方便??捎糜谠诎麧{中形成許多真核蛋白正確折迭和活性所要求的二硫鍵。低溫誘導也可增加可溶性目標蛋白的比例。